← Назад
Г. Среды для пресноводных зелёных микроводорослей
BBMBBM — Bold's Basal Medium (основная среда Болда)
Универсальная среда для зелёных микроводорослей
- Применение
- Chlorella, Scenedesmus (Desmodesmus), Chlorococcum, Ankistrodesmus, Bracteacoccus, почвенные зелёные микроводоросли
- pH
- 6,6–6,8
- Источник
- Bischoff & Bold, 1963; UTEX Medium BBM
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaNO₃ | 0,25 г |
| CaCl₂·2H₂O | 0,025 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,075 г |
| K₂HPO₄ | 0,075 г |
| KH₂PO₄ | 0,175 г |
| NaCl | 0,025 г |
| Раствор ЭДТА-KOH | 1,0 мл |
| Раствор железа (FeSO₄-H₂SO₄) | 1,0 мл |
| Раствор борной кислоты | 1,0 мл |
| Раствор микроэлементов BBM | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор ЭДТА-KOH для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Na₂ЭДТА | 5,0 г |
| KOH | 3,1 г |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор железа (FeSO₄-H₂SO₄) для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C в тёмном стекле, 2–3 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| FeSO₄·7H₂O | 498 мг |
| H₂SO₄ (конц.) | 0,1 мл (2 капли) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор борной кислоты для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| H₃BO₃ | 1,142 г |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор микроэлементов BBM (по Болду)
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| ZnSO₄·7H₂O | 882 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 157 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 144 мг |
| MoO₃ | 71 мг (или Na₂MoO₄·2H₂O 119 мг) |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 49 мг |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Приготовление
В 900 мл воды растворить NaNO₃ → MgSO₄·7H₂O → NaCl → K₂HPO₄ → KH₂PO₄ → внести по 1 мл раствора ЭДТА-KOH, раствора железа, раствора борной кислоты и раствора микроэлементов → последним при интенсивном перемешивании добавить CaCl₂·2H₂O → довести до 1000 мл → pH 6,6–6,8.
Примечания
- Четыре вспомогательных раствора готовятся и хранятся РАЗДЕЛЬНО — это принципиальное требование прописи Болда: при смешивании концентратов ЭДТА-KOH и FeSO₄-H₂SO₄ немедленно выпадает осадок.
- Фосфаты и CaCl₂ вносят из разных стоков и обязательно в разбавленный раствор, иначе выпадает Ca₃(PO₄)₂ — характерная белая муть.
- Пара K₂HPO₄ + KH₂PO₄ образует фосфатный буфер, поддерживающий слабокислый pH; дополнительный буфер не нужен.
- Молярный эквивалент азота: NaNO₃ — 2,94 мМ, что в шесть раз ниже, чем в BG-11; для накопительных культур используют 3N-BBM.
- Щёлочь вносят первой: в нейтральной воде ЭДТА растворяется крайне медленно. Раствор хранят отдельно от раствора железа — при смешивании концентратов выпадает осадок.
- Серная кислота выполняет роль консерванта: без неё Fe²⁺ быстро окисляется до Fe³⁺ и выпадает в виде гидроксида. Появление ржавой мути — признак негодности, раствор обновляют каждые 2–3 месяца.
- В прописи Болда бор вынесен из общего раствора микроэлементов в отдельный раствор из-за высокой концентрации. Растворяется медленно — подогреть до 40 °C.
- Триоксид молибдена MoO₃ в воде практически нерастворим — его предварительно растворяют в 0,1 мл 1 М NaOH. При эквимолярной замене на Na₂MoO₄·2H₂O этот шаг не нужен.