← Назад
Г. Среды для пресноводных зелёных микроводорослей
MLAMLA
Современная среда широкого профиля
- Применение
- Пресноводные цианобактерии (в т. ч. токсигенные), зелёные, диатомовые, динофлагелляты; стандарт коллекции ANACC
- pH
- 6,8–7,2
- Источник
- Bolch & Blackburn, 1996
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaNO₃ | 170 мг |
| K₂HPO₄ | 6,96 мг |
| MgSO₄·7H₂O | 49,4 мг |
| CaCl₂·2H₂O | 29,4 мг |
| NaHCO₃ | 16,9 мг |
| H₃BO₃ | 2,47 мг |
| Na₂SiO₃·9H₂O | 30 мг |
| Раствор микроэлементов MLA | 1,0 мл |
| Раствор витаминов | 0,5 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор микроэлементов MLA — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 436 мг |
| FeCl₃·6H₂O | 315 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 18,0 мг |
| Первичный раствор № 2 (ZnSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 3 (CoCl₂) | 1 мл |
| Первичный раствор № 4 (CuSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 5 (Na₂MoO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 6 (Na₂SeO₃) | 1 мл (по необходимости) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы микроэлементов f/2 (каждый готовится отдельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| № 1 — MnCl₂·4H₂O | 1,80 г на 100 мл |
| № 2 — ZnSO₄·7H₂O | 0,220 г на 100 мл |
| № 3 — CoCl₂·6H₂O | 0,100 г на 100 мл |
| № 4 — CuSO₄·5H₂O | 0,098 г на 100 мл |
| № 5 — Na₂MoO₄·2H₂O | 0,063 г на 100 мл |
Раствор витаминов (стандартная пропись f/2) — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 0,5 мл на 1 л среды · хранение −20 °C аликвотами по 1–2 мл, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Тиамин·HCl (витамин B₁) | 20 мг |
| Первичный раствор биотина | 1 мл |
| Первичный раствор B₁₂ | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы витаминов (готовятся раздельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение −20 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Биотин (витамин H) | 10 мг на 100 мл |
| Цианокобаламин (витамин B₁₂) | 10 мг на 100 мл |
Приготовление
Растворить NaNO₃ → K₂HPO₄ → MgSO₄·7H₂O → NaHCO₃ → H₃BO₃ → 1 мл раствора микроэлементов → CaCl₂·2H₂O → скорректировать pH → последним Na₂SiO₃·9H₂O → автоклавировать → стерильно внести 0,5 мл раствора витаминов.
Примечания
- MLA разработана как единая среда для широкого спектра пресноводного фитопланктона — удобна, когда в одной коллекции содержатся разные систематические группы.
- Первичные растворы для раствора микроэлементов MLA те же, что и для f/2; дополнительно готовят первичный раствор селенита (Na₂SeO₃ 12,9 мг на 100 мл).
- Na₂SiO₃·9H₂O вносят только при культивировании диатомовых.
- По составу совпадает с рабочим раствором f/2; единственное отличие — селенит натрия. Первичный раствор № 6: Na₂SeO₃ 12,9 мг на 100 мл. Селен необходим динофлагеллятам и части золотистых микроводорослей; для зелёных и цианобактерий его исключают.
- Пять растворов готовят и хранят в отдельных флаконах с чёткой маркировкой. Смешивать их между собой до внесения в рабочий раствор нельзя.
- Витамины НЕ автоклавируют — только стерильная фильтрация через мембрану 0,22 мкм. Тиамин при 121 °C разрушается на 40–70 % и деградирует при pH выше 8 даже без нагрева, поэтому витамины вносят в остывшую среду непосредственно перед посевом. Повторное замораживание аликвот недопустимо.
- Биотин плохо растворим в холодной воде — его растворяют в 1 мл 50 % этанола или в тёплой воде при pH 8, затем доводят объём. Раствор B₁₂ имеет характерную розово-красную окраску; обесцвечивание означает разложение витамина.