Д. Теңіз суы негізіндегі орталар
GUILLARD_F2f/2 (Гиллард ортасы)
Теңіз фитопланктонына арналған әлемдегі басты орта
- Қолданылуы
- Nannochloropsis, Isochrysis, Tetraselmis, Pavlova, теңіздік диатомды және талшықты микробалдырлар; аквадақыл
- pH
- 8,0–8,2 (теңіз суының табиғи pH-ы)
- Дереккөз
- Guillard & Ryther, 1962; Guillard, 1975
Құрамы
| Компонент | 1 л-ге мөлшері |
|---|---|
| Теңіз суы (0,22 мкм сүзілген) | 1000 мл |
| NaNO₃ | 75 мг (100 мл-ге 7,5 г ерітіндіден 1 мл) |
| NaH₂PO₄·H₂O | 5 мг (100 мл-ге 0,5 г ерітіндіден 1 мл) |
| Na₂SiO₃·9H₂O | 30 мг (тек f/2 + Si, диатомды микробалдырлар үшін) |
| f/2 микроэлементтер ерітіндісі | 1,0 мл |
| Витаминдер ерітіндісі | 0,5 мл |
f/2 микроэлементтер ерітіндісі (Гиллард бойынша) — жұмыс ерітіндісі
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C, 12 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 436 мг |
| FeCl₃·6H₂O | 315 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 18,0 мг (немесе № 1 бастапқы ерітіндіден 1 мл) |
| № 2 бастапқы ерітінді (ZnSO₄) | 1 мл |
| № 3 бастапқы ерітінді (CoCl₂) | 1 мл |
| № 4 бастапқы ерітінді (CuSO₄) | 1 мл |
| № 5 бастапқы ерітінді (Na₂MoO₄) | 1 мл |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
f/2 микроэлементтерінің бастапқы ерітінділері (әрқайсысы бөлек дайындалады)
әрқайсысы 100 мл-ге · жұмыс ерітіндісінің 100 мл-іне әрқайсысынан 1 мл-ден алынады · сақтау 4 °C, 12 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| № 1 — MnCl₂·4H₂O | 100 мл-ге 1,80 г |
| № 2 — ZnSO₄·7H₂O | 100 мл-ге 0,220 г |
| № 3 — CoCl₂·6H₂O | 100 мл-ге 0,100 г |
| № 4 — CuSO₄·5H₂O | 100 мл-ге 0,098 г |
| № 5 — Na₂MoO₄·2H₂O | 100 мл-ге 0,063 г |
Витаминдер ерітіндісі (f/2 стандартты рецептурасы) — жұмыс ерітіндісі
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 0,5 мл шығыны · сақтау −20 °C, 1–2 мл аликвоталармен, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Тиамин·HCl (витамин B₁) | 20 мг |
| Биотиннің бастапқы ерітіндісі | 1 мл |
| B₁₂ бастапқы ерітіндісі | 1 мл |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
Витаминдердің бастапқы ерітінділері (бөлек дайындалады)
әрқайсысы 100 мл-ге · жұмыс ерітіндісінің 100 мл-іне әрқайсысынан 1 мл-ден алынады · сақтау −20 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Биотин (витамин H) | 100 мл-ге 10 мг |
| Цианокобаламин (витамин B₁₂) | 100 мл-ге 10 мг |
Дайындау
Теңіз суын сүзіп, автоклавтау (немесе пастерлеу), содан соң суыту керек. 100 мл-ге концентраттар дайындалады: NaNO₃ 7,5 г және NaH₂PO₄·H₂O 0,5 г — литрге 1 мл-ден алынады. Суыған стерильді теңіз суына асептикалық жолмен 1 мл нитрат, 1 мл фосфат, 1 мл микроэлементтер ерітіндісі, 0,5 мл витаминдер ерітіндісі енгізіледі; силикат — жеке стерильді ерітінді түрінде (100 мл-ге 3 г), литрге 1 мл.
Ескертулер
- «f/2» атауы бастапқы «f» ортасын екі есе сұйылтуды білдіреді. Сондай-ақ f/4 және f/10 (олиготрофты түрлер үшін) және «f» (қос концентрация, қарқынды өсу) қолданылады.
- Теңіз суы БӨЛЕК зарарсыздандырылады, биогендер суығаннан кейін енгізіледі: теңіз суын фосфат және силикатпен бірге автоклавтау коллоидты SiO₂ мен карбонаттар тұнбасын береді.
- Пастерлеу (80 °C, 30 мин, 24 сағ аралықпен үш рет) — теңіз суының карбонаттық тепе-теңдігін сақтайтын, автоклавтауға қарағанда жұмсақ балама.
- Молярлық эквиваленттер: NaNO₃ — 882 мкМ; NaH₂PO₄·H₂O — 36,2 мкМ (N:P қатынасы ≈ 24:1).
- Реті: алдымен Na₂ЭДТА ерітіледі, содан кейін FeCl₃ (мольдік қатынасы ≈ 1:1, ерітінді сары-сабан түске енеді), одан соң әр бастапқы ерітіндіден 1 мл-ден қосылады. Микроэлементтер дәл осы бастапқы ерітінділерден енгізіледі — 0,6–2 мг-ды дәл өлшеу мүмкін емес.
- Бес ерітінді анық таңбаланған жеке құтыларда дайындалып, сақталады. Оларды жұмыс ерітіндісіне енгізгенге дейін бір-бірімен араластыруға болмайды.
- Витаминдерді автоклавтауға БОЛМАЙДЫ — тек 0,22 мкм мембрана арқылы стерильді сүзу. Тиамин 121 °C-та 40–70 %-ға ыдырайды және қыздырусыз да pH 8-ден жоғары болғанда деградацияға ұшырайды, сондықтан витаминдер суыған ортаға егу алдында бірден енгізіледі. Аликвоталарды қайта мұздатуға болмайды.
- Биотин суық суда нашар ериді — оны 1 мл 50 % этанолда немесе pH 8 болғанда жылы суда ерітеді, содан кейін көлемін жеткізеді. B₁₂ ерітіндісінің тән қызғылт-қызыл түсі болады; түссізденуі витаминнің ыдырағанын білдіреді.