TAP (Tris-Acetate-Phosphate)

Раствор солей TAP (×40)

на 1 л · расход 25 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, не более 1 мес.

Раствор фосфатов TAP

на 100 мл · расход 0,375 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.

Раствор микроэлементов по Хатнеру (Hutner's trace elements)

на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C

Растворить Tris в 900 мл воды → внести 25 мл раствора солей TAP → 0,375 мл раствора фосфатов → 1 мл раствора по Хатнеру → добавить уксусную кислоту по каплям до pH 7,0 (обычно около 1,0 мл) → довести до 1000 мл → автоклавировать.

• Уксусная кислота выполняет двойную роль: источник органического углерода для миксотрофного роста и агент для коррекции pH. Отсюда её внесение в самом конце, под контролем pH-метра.
• Раствор солей и раствор фосфатов хранят раздельно: в одном флаконе кальций и фосфат немедленно дают осадок.
• Варианты: TP — тот же состав без уксусной кислоты (только фотоавтотрофный рост); TAP-N — без NH₄Cl (индукция накопления липидов и крахмала).
• Из-за ацетата TAP исключительно легко контаминируется бактериями и грибами — обязательна строгая асептика и работа в ламинарном боксе.
• Молярный эквивалент буфера: Tris — 20 мМ.
• Это макросолевой концентрат с большим расходом (25 мл/л), поэтому он готовится на литр, а не на 100 мл: литра хватает на 40 л среды. Помутнение — признак бактериального роста, такой раствор бракуют.
• Раствор очень концентрированный; соли растворяют при подогреве до 40 °C и постоянном перемешивании. Хранят отдельно от раствора солей TAP — совмещение с кальцием даёт осадок фосфата кальция.
• Особая методика: все соли, кроме ЭДТА и FeSO₄, растворяют в 55 мл горячей воды; Na₂ЭДТА — отдельно в 25 мл; FeSO₄ — в 5 мл. Растворы сливают горячими, доводят pH до 6,7 горячим 20 % KOH, доливают до 100 мл и оставляют на 1–2 недели при комнатной температуре в неплотно закрытой колбе. За это время цвет меняется с зелёного на пурпурный и выпадает ржавый осадок — его отфильтровывают. Раствор годен, пока остаётся пурпурно-фиолетовым.