← Артқа
Г. Тұщы су жасыл микробалдырларына арналған орталар
TAPTAP (Tris-Acetate-Phosphate)
Ацетаты бар миксотрофты орта
- Қолданылуы
- Chlamydomonas reinhardtii (әлемдік стандарт), басқа да қозғалғыш жасыл микробалдырлар; генетикалық және физиологиялық жұмыстар
- pH
- 7,0 (сірке қышқылымен жеткізіледі)
- Дереккөз
- Gorman & Levine, 1965
Құрамы
| Компонент | 1 л-ге мөлшері |
|---|---|
| Трис (Tris-негіз) | 2,42 г |
| Мұзды сірке қышқылы | 1,0 мл |
| TAP тұздар ерітіндісі (×40) | 25 мл |
| TAP фосфаттар ерітіндісі | 0,375 мл |
| Хатнер бойынша микроэлементтер ерітіндісі | 1,0 мл |
| Дистилденген су | 1000 мл-ге дейін |
| — ортадағы қорытынды концентрациялар — | |
| NH₄Cl | 0,375 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,10 г |
| CaCl₂·2H₂O | 0,05 г |
| K₂HPO₄ | 0,108 г |
| KH₂PO₄ | 0,056 г |
TAP тұздар ерітіндісі (×40)
1 л-ге · 1 л ортаға 25 мл шығыны · сақтау 4 °C, 1 айдан аспайды
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| NH₄Cl | 15,0 г |
| MgSO₄·7H₂O | 4,0 г |
| CaCl₂·2H₂O | 2,0 г |
| Дистилденген су | 1000 мл-ге дейін |
TAP фосфаттар ерітіндісі
100 мл-ге · 1 л ортаға 0,375 мл шығыны · сақтау 4 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| K₂HPO₄ | 28,8 г |
| KH₂PO₄ | 14,4 г |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
Хатнер бойынша микроэлементтер ерітіндісі (Hutner's trace elements)
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 5,00 г |
| ZnSO₄·7H₂O | 2,20 г |
| H₃BO₃ | 1,14 г |
| MnCl₂·4H₂O | 506 мг |
| FeSO₄·7H₂O | 499 мг |
| CoCl₂·6H₂O | 161 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 157 мг |
| (NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O | 110 мг |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
Дайындау
Tris-ті 900 мл суда еріту → TAP тұздар ерітіндісінен 25 мл енгізу → фосфаттар ерітіндісінен 0,375 мл → Хатнер ерітіндісінен 1 мл → pH 7,0 болғанша сірке қышқылын тамшылатып қосу (әдетте шамамен 1,0 мл) → 1000 мл-ге дейін жеткізу → автоклавтау.
Ескертулер
- Сірке қышқылы қос рөл атқарады: миксотрофты өсу үшін органикалық көміртек көзі әрі pH-ты түзету агенті. Сондықтан ол ең соңында, pH-метр бақылауымен енгізіледі.
- Тұздар ерітіндісі мен фосфаттар ерітіндісі бөлек сақталады: бір құтыда кальций мен фосфат дереу тұнба береді.
- Нұсқалары: TP — сірке қышқылы жоқ дәл сол құрам (тек фотоавтотрофты өсу); TAP-N — NH₄Cl-сіз (липидтер мен крахмалдың жинақталуын индукциялау).
- Ацетаттың салдарынан TAP бактериялармен және саңырауқұлақтармен өте оңай контаминацияланады — қатаң асептика және ламинарлы боксте жұмыс істеу міндетті.
- Буфердің молярлық эквиваленті: Tris — 20 мМ.
- Бұл — шығыны көп (25 мл/л) макротұзды концентрат, сондықтан ол 100 мл-ге емес, литрге дайындалады: бір литр 40 л ортаға жетеді. Лайлану — бактериялық өсудің белгісі, мұндай ерітінді жарамсыз деп танылады.
- Ерітінді өте концентрацияланған; тұздар 40 °C-қа дейін жылытылып, үздіксіз араластыра отырып ерітіледі. TAP тұздар ерітіндісінен бөлек сақталады — кальциймен қосылуы кальций фосфатының тұнбасын береді.
- Ерекше әдістеме: ЭДТА мен FeSO₄-тен басқа барлық тұздар 55 мл ыстық суда ерітіледі; Na₂ЭДТА — бөлек 25 мл-де; FeSO₄ — 5 мл-де. Ерітінділер ыстық күйінде қосылады, pH ыстық 20 % KOH-пен 6,7-ге дейін жеткізіледі, көлемі 100 мл-ге толтырылып, тығыз жабылмаған колбада бөлме температурасында 1–2 аптаға қалдырылады. Осы уақыт ішінде түсі жасылдан пурпур түске ауысады және тат түсті тұнба түзіледі — оны сүзіп алып тастайды. Ерітінді пурпур-күлгін түсін сақтап тұрғанша жарамды.